鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析

浙江农业学报

鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析

（江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014）

出版日期:2015-10-25 发布日期:2015-10-20

Prokaryotic expression and characteristics of nonstructural protein NS5 of goose Tembusu virus#br#

（Institute of Veterinary Medicine， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology， Ministry of Agriculture， National Center for Engineering Research of Veterinary Bio\|products， Nanjing 210014， China）

Online:2015-10-25 Published:2015-10-20

摘要/Abstract

摘要： 通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5对其纯化，并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列，设计1对特异性引物，利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列，并将其定向克隆至原核表达载体pET32a中，获得重组表达质粒pET32a\|NS5，经双酶切鉴定及测序正确后，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中。经IPTG诱导表达，表达的重组融合蛋白最终经SDS\|PAGE及Western\|blotting鉴定。结果显示，NS5融合蛋白分子质量约为120 ku，在诱导后5 h达到表达量高峰，融合蛋白以包涵体形式存在，Western\|blotting显示原核表达的蛋白可被兔抗鹅坦布苏病毒血清特异性识别，表明以NS5蛋白为抗原制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性。

关键词: 鹅坦布苏病毒, NS5 蛋白, 原核表达

Abstract: The study was aimed to highly express NS5 protein of goose Tembusu virus （GTMUV） JS804 in Escherichia coli， then the expressed proteins was purified and characterized. The non\|structural protein 5 （NS5） gene of goose Tembusu virus in JS804 strain was amplified and cloned into expression vector pET32a（+）. The expression vector pET32a\|NS5 was then transformed into BL21 （DE3） for expression with induction of IPTG. The expressed pET32a\|NS5 products were analyzed in SDS\|PAGE and Western blotting. The molecular weight of recombinant protein NS5 was 120 ku. After 5 h induction by IPTG， the yield of fusion proteins reached peaks. The analysis showed that the fusion proteins were expressed in E.coli into inclusion bodies， and was recognized specially by rabbit anti\|Tembusu virus polyclonal antibody， which indicated a relatively high sensitivity and specificity.

Key words: goose Tembusu virus, NS5 protein, prokaryotic expression

韩凯凯，李银*，黄欣梅，赵冬敏，刘宇卓，刘青涛，谢星星，安凤娇. 鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析[J]. 浙江农业学报.