摘要: 为开展鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联苗的研究,将密码子优化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因插入转移载体pEP\|BGH\|end构建了pEP\|BGH\|E重组表达质粒。在鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体(pDEV\|vac)的基础上,首先通过Red E/T两步重组法构建了EF1启动子替换GFP基因CMV启动子的pDEV\|EF1突变体克隆,并将pEP\|BGH\|E质粒上的重组表达框pCMV\|E\|BGH\|pA再次通过两步重组克隆至pDEV\|EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带有外源基因DTMUV E的突变体克隆pDEV\|E。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒rDEV\|E。病毒蚀斑大小测定结果显示,rDEV\|E在CEFs上的蚀斑面积较亲本株相比稍有减少。Western blotting分析表明,外源蛋白E在病毒感染的CEFs细胞中成功表达。