抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

浙江农业学报

抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

（温州科技职业学院，浙江温州 325006）

出版日期:2015-06-25 发布日期:2015-06-26

Preparation and identification of monoclonal antibodies against the nucleocapsid protein of porcine epidemic diarrhea virus

（ Wenzhou Vocational College of Science and Technology， Wenzhou 325006， China）

Online:2015-06-25 Published:2015-06-26

摘要/Abstract

摘要： 为了制备猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白的单克隆抗体（Mab），以原核表达的融合蛋白GST\|N为免疫原，免疫7周龄雌性BALB/c小鼠，利用重组蛋白His\|N和Vero细胞培养病毒液作为检测筛选抗原，采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果表明：获得3株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株（5B2，3H1和4H5），单抗亚型鉴定均为IgG1，轻链均为Kappa链。Western blot和间接免疫荧光试验结果表明，Mab能够识别重组N蛋白和PEDV。制备获得3株稳定性好、特异性强的Mab，可为今后建立检测猪流行性腹泻特异性诊断方法和研究PEDV核衣壳蛋白功能奠定基础。

关键词: 猪流行性腹泻病毒, N蛋白, 单克隆抗体

Abstract: In order to prepare the monoclonal antibodies against porcine epidemic diarrhea virus （PEDV） N protein， BALB/c mice were immunized with purified recombinant N protein emulsified in Freunds adjuvant. The monoclonal antibodies （Mabs） were prepared by fusing mouse myloma cells（SP2/0） with the spleen cells from BALB/c mice immunized with the purified recombinant N protein. Three hybridoma cell lines secreting Mabs were screened by indirect enzyme\|linked immunosorbent assay （ELISA） and named as 5B2， 3H1 and 4H5， respectively. The results of Western blot and immunofluorescence assay analyses showed that the three Mabs could react specifically with the recombinant N protein or PEDV. The isotypes of three Mabs belong to IgGl subtype with Kappa chain. It was indicated that these Mabs may be useful for developing the diagnosis methods and investigating the pathogenicity of PEDV.

Key words: porcine epidemic diarrhea virus(PEDV）, N protein, monoclonal antibody

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