›› 2008, Vol. 20 ›› Issue (6): 0-413.
• 论文 •
重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立
王方昆；袁秀芳；刘思当；张存；徐丽华；王一成
- 浙江省农业科学院,畜牧兽医研究所,浙江,杭州,310021;山东农业大学,动科院,山东,泰安,272018;浙江省农业科学院,畜牧兽医研究所,浙江,杭州,310021;山东农业大学,动科院,山东,泰安,272018
An indirect ELISA method based on recombinant nucleoprotein(NP) for detection of antibodies to swine influenza virus(SIV)
摘要： 用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法.ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37 ℃温育40 min,底物显色37 ℃ 15 min.经重复性试验、交叉试验、竞争抑制试验等试验,结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好.利用TG-ROC软件确定了自制ELISA(NP-ELISA)酶标板的临界值为0.20,特异性和敏感性分别为95.83和91.43.与美国IDEXX试剂盒相比较,符合率为94.00,无显著性差异.用已建立的ELISA方法检测临床血清样本356份,总阳性率为35.40.
