›› 2009, Vol. 21 ›› Issue (3): 0-224.
• 论文 •
李明凤 1,2,魏战勇 1,王学斌 2,张红英 1,王亚宾 1,崔保安2,*
LI Ming-feng;W EI Zhan-yong;WANG Xue—bin;ZHANG Hong-ying;WANG Ya-bin;CUl Bao-an;*
摘要: 利用PCR技术扩增出猪细小病毒VP2保守区基因194 bp片段,并克隆到pGEMT载体上,纯化质粒作为PCR检测的标准模板,以l0倍梯度稀释质粒为标准模板,进行SYBRGreenI荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪细小病毒的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1.0×10 2 拷贝/μL ,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对10份疑似病料和阴性病料进行了检测,发现10份均为荧光定量PCR 阳性。而常规PCR只能检测出7份阳性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床猪细小病毒(PPV)的检测。