猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建

›› 2009, Vol. 21 ›› Issue (1): 0-38.

• 论文 •

猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建

陆永干1,2，戴贤君 3，姚建红 2，黄利权 1

1 浙江大学动物科学学院，浙江杭州310029；2 杭州市畜牧兽医局，浙江杭州310020；3 中国计量学院生命科学学院，浙江杭州310018

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-01-25 发布日期:2009-01-25

Construction of standard positive template of the fluorescent quantitative PCR assay for detection of swine fever virus

LU Yong—gan;DAI Xian—jun;YAO Jian—hong;HUANG Li—quan

1 College ofAnimal Science，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China； 2 Hangzhou Bureau of Husbandry and Veterinary，Hangzhou 310020，China； 3 College of Life Science，China Jiliang University，Hangzhou 310018，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-01-25 Published:2009-01-25

摘要/Abstract

摘要： 设计扩增猪瘟病毒(swine fever virus，SFV)核酸5’端非翻译区的引物，采用RT-PCR方法克隆目的片段并插入PMD一18 simple T质粒，重组质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，提取质粒经PCR和序列测定证实为阳性重组质粒，命名为pSF。将构建的pSF作为标准阳性模板进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测表明，此模板在一20℃保存6个月对结果无显著影响；对于1×10 9，1×10 7，1×10 5拷贝／2μL 的pSF用FQ-PCR方法测定的ct值最大变异系数分别为1．55％；使用该模板建立的定量范围为1×10 2—1×10 11拷贝／2 μL ；构建的阳性重组质粒pSF具有良好的稳定性和特异性。该方法可以用于临床诊断。

关键词: 猪瘟病毒, 荧光定量PCR, 重组质粒

Abstract: 5 ‘UTR of swine fever virus(SFV)was amplified by RT-PCR and cloned into pMD-18 simple T vector to construct a recombinant plasmid pSF，which was used as standard positive template for the fluorescent quantitative PCR(FQ—PCR)to
detect SFV．The pSF was identified by PCR and DNA sequence analysis．The plasmid Was stable after 6 months storage at 一20℃ ．When the plasmids DNA of 1．0×10 9 ， 1．0×10 7 and 1．0×10 7 copies／2 μL were used as template，the largest variation coefiqeient of Ct value was 1．55％．and the FQ—PCR provides a broad linear range from 1×10 7 to 1×10 11 copies of DNA per reaction．The pSF was specific and stable for the FQ-PCR．The method can be used for the clinical diagnosis.

Key words: swine fever virus, fluorescent quantitative PCR(FQ-PCR), recombinant plasmid

陆永干;戴贤君;姚建红;黄利权 . 猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建[J]. , 2009, 21(1): 0-38.

LU Yong—gan;DAI Xian—jun;YAO Jian—hong;HUANG Li—quan . Construction of standard positive template of the fluorescent quantitative PCR assay for detection of swine fever virus[J]. , 2009, 21(1): 0-38.

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猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建

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