新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性

浙江农业学报

新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性

（1 山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271018;2 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江杭州310021）

出版日期:2014-11-25 发布日期:2014-12-02

Prokaryotic expression of the recombinant σC protein of new Muscovy duck reovirus and preliminary study of the antigen characteristic

（1 College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shandong Agricultural University，Taian 271018，China;2 Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences， Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China）

Online:2014-11-25 Published:2014-12-02

摘要/Abstract

摘要： 新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原，该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT\|PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因，经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理，插入到pET\|28a（+）原核表达载体，获得重组质粒pET\|28a（+）\|σC。将重组阳性质粒转化至BL21（DE3）感受态细胞，诱导表达后经SDS\|PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析，蛋白分子量约为36 kDa。重组蛋白经纯化后免疫实验兔，获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明，新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。

关键词: 新型呼肠孤病毒, σC基因, 原核表达, 兔抗血清

Abstract: The new Muscovy duck reovirus （N\|DRV） was detected in recently years which could result in serious disease of Muscovy duck. It was different from classical MDRV in host range， characteristics in vitro， clinical pathogenicity and characterization of autoimmunity etc. The σC gene of N\|DRV was amplified by RT\|PCR， digested by NcoⅠand XhoⅠ， and inserted into prokaryotic expression vector pET\|28a（+）. The expression plasmid pET\|28a\|σC was transformed into the competent BL21（DE3）. The fusion protein was expressed after induction and presented mainly in inclusion body. SDS\|PAGE analysis showed that the fusion protein （36 kDa） was expressed correctly. The specific antiserum against σC was produced in rabbit immunized three times by the purified fusion protein σC. The protein σC had high reaction activity through Western Blot and IFA assay.

Key words: new Muscovy duck reovirus, σC gene, prokaryotic expression, rabbit anti serum

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CHEN Hai\|peng1，2， YUN Tao2， ZHANG Cun2，*， YU Bin2， NI Zheng2， Hua Jiong\|gang2， CUI Yan\|shun1，*. Prokaryotic expression of the recombinant σC protein of new Muscovy duck reovirus and preliminary study of the antigen characteristic [J]. .

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