番鸭呼肠孤病毒通用RT\|PCR检测方法的建立

浙江农业学报

番鸭呼肠孤病毒通用RT\|PCR检测方法的建立

（1 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江杭州 310021；2 嘉兴职业技术学院，浙江嘉兴 314036）

出版日期:2014-11-25 发布日期:2014-12-02

Establishment of universal RT\|PCR for detection of Muscovy duck reovirus

（1 Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science， Zhejiang Academy of Agricultural Sciences， Hangzhou 310021， China;2 Jiaxing Vocational Technical College， Jiaxing 314036， China）

Online:2014-11-25 Published:2014-12-02

摘要/Abstract

摘要： 根据经典和新型水禽呼肠孤病毒σA基因的保守序列设计一对PCR引物，通过优化病毒RNA提取方法和PCR条件，建立了番鸭呼肠孤病毒通用RT\|PCR检测方法。该方法可自1株经典型或4株新型水禽呼肠孤病毒特异性扩增出436 bp条带，其最低病毒检出量为36 TCID50，而对鸭甲肝病毒、鸭瘟病毒、新城疫病毒、坦布苏病毒、番鸭细小病毒、产蛋下降综合征病毒和H9N2亚型禽流感病毒扩增均为阴性。对2011～2012采集的224份（番鸭74、鹅68、鸭82）疑似临床病料进行检测，结果56份为阳性，番鸭、鸭和鹅阳性率分别为595%（44/74），110%（9/82）和44%（3/68），表明水禽呼肠孤病毒主要在番鸭中流行。

关键词: 番鸭呼肠孤病毒, RT\, PCR, σA基因, 通用检测方法

Abstract: According to the conservative gene sequences of classical and novel waterfowl reovirus sigma A submitted in GenBank， a pair of universal primers were designed to carry out one\|step RT\|PCR amplification for detecting Muscovy duck reovirus. The PCR reaction condition was optimized and the ultimate one\|step RT\|PCR method had been established. A 436\|bp PCR product was specifically amplified from 1 classical and 4 new waterfowl\|origin reovirus strains with high sensitivity of 36 TCID50 viruses，however， no product could obtain from duck hepatitis A virus， duck enteritis virus， Newcastle disease virus， Tembusu virus， Muscovy duck parvovirus， egg drop syndrome virus and H9N2 subtype avian influenza virus. With the established method， out of 224 clinical specimens from sick flocks of birds during 2011-2012， a total of 56 were positive for reovirus. The positive incidences of Muscovy ducklings， ducklings and goslings were 595%（44/74）， 11%（9/82）and 44%（3/68）， respectively. The results demonstrated that reovirus infection were mainly epidemic in Muscovy duck.

Key words: Muscovy duck reovirus, RT\, PCR, σA gene, universal detection method

叶伟成1，余斌1，刘跃生2，华炯钢1，云涛1，张存1，*. 番鸭呼肠孤病毒通用RT\|PCR检测方法的建立 [J]. 浙江农业学报.

YE Wei\|cheng1， YU Bin1， LIU Yue\|sheng2，HUA Jiong\|gang1， YUN Tao1， ZHANG Cun1，*. Establishment of universal RT\|PCR for detection of Muscovy duck reovirus [J]. .

[1]	张飘, 贺欣薇, 杨霞, 曾茂芹, 刘妍罕, 张扬子, 杨颖, 温贵兰, 程振涛, 文明. 鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用[J]. 浙江农业学报, 2021, 33(2): 215-222.
[2]	王伟科, 陆娜, 闫静, 宋吉玲, 袁卫东, 周祖法. 秀珍菇S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(PpSAMS)的克隆与表达分析[J]. 浙江农业学报, 2021, 33(1): 62-68.
[3]	徐秀红, 刘金亮, 李栋成, 刘仁祥. 不同类型烟草种质的烟碱含量变化与相关基因表达水平[J]. 浙江农业学报, 2020, 32(9): 1555-1563.
[4]	黄小珍, 乔中全, 曾慧杰, 李永欣, 何钢, 王晓明. 紫薇花器官发育调控基因LiFUL1的分离与表达分析[J]. 浙江农业学报, 2020, 32(7): 1206-1214.
[5]	孙瑞萍, 王峰, 晁哲, 刘海隆, 邢漫萍, 刘圈炜, 黄丽丽, 郑心力, 魏立民. 屯昌猪PDK4基因克隆及其组织表达分析[J]. 浙江农业学报, 2020, 32(6): 978-985.
[6]	云涛, 华炯钢, 叶伟成, 倪征, 陈柳, 张存. 新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J]. 浙江农业学报, 2020, 32(4): 571-576.
[7]	徐麒麟, 齐桂兰, 莫桂林, 朱江, 雷春龙, 吴永胜, 许祯莹, 李娟. 蚯蚓提取液对家蚕热激蛋白水平及免疫功能的影响[J]. 浙江农业学报, 2020, 32(4): 593-600.
[8]	张玉龙, 马志宇, 崔耀成, 谭天宇, 姚彩霞, 樊利虹, 左之才, 才冬杰. 肉牛呼吸道感染主要细菌性病原多重PCR检测方法的建立[J]. 浙江农业学报, 2020, 32(2): 210-217.
[9]	姜瑶瑶, 李静, 蔡年俊, 陈剑平, 张恒木. 一个植物原纤维蛋白基因的克隆及其表达特性分析[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(9): 1399-1404.
[10]	白俊艳, 曹恒, 王旭, 杨又兵, 樊红灯, 付学言, 时坤鹏, 董智豪, 卢小宁, 李新月, 郝伟光, 李子衡, 郑飞扬. 绵羊GH基因的Pvu Ⅱ 位点的多态性与其生长性状的关联分析[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(9): 1416-1422.
[11]	纪艺, 姜媛媛, 汪小福, 徐晓丽, 徐俊锋, 李玥莹, 陈笑芸. 几种动物生鲜肌肉组织样品DNA提取方法的比较研究[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(9): 1471-1477.
[12]	赵建霞, 沈颖越, 冯伟林, 金群力, 宋婷婷, 范丽军, 蔡为明. 双孢蘑菇内参基因的筛选与矫正[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(8): 1312-1320.
[13]	陈琳, 周青青, 顾青, 郦萍. 实时定量PCR法快速检测水产品中的副溶血性弧菌[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(5): 823-828.
[14]	孟幼青, 汪恩国, 李艳敏, 明珂, 袁亦文. 柑橘黄龙病菌PCR阳性病株空间分布格局与参数特征应用研究[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(4): 579-587.
[15]	杨又兵, 卞军平, 吴燕, 娄然, 李世豪. 猪FTO基因多态性与肉质性状的关联分析[J]. 浙江农业学报, 2019, 31(12): 1971-1978.