草莓流式细胞检测提取方法的优化
- （杭州市农业科学研究院 生物技术研究所，浙江 杭州 310024）
Optimization of extraction method for flow cytometry in strawberry
- （Institute of Biotechnology, Hangzhou Academy of Agricultural Sciences， Hangzhou 310024 China）
摘要： 为了制备高纯度的草莓细胞核悬液，提高流式细胞仪检测准确性，获得变异系数（CV值）小、可信度高的检测数据，为草莓倍性育种提供技术支持。通过优化过滤方法与OTTO提取液，应用流式细胞仪对二倍体川九1号和八倍体红颊草莓进行倍性检测。结果表明，较好的细胞核悬液过滤方法为先用70 μm过滤器，再用40 μm过滤器的二步过滤法；优化提取液配方为OTTOⅠ缓冲液：100 mmol·L-1柠檬酸，0.5%（V/V）Tween20和2%（V/V）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）， pH 2~3；OTTOⅡ缓冲液：400 mmol·L-1 Na2HPO4·12H2O, pH 8～9。用优化的提取方法制备的草莓细胞核悬液经流式细胞仪检测分析，其直方图主峰窄而集中、变异系数为5.43%。
