基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备(

›› 2011, Vol. 23 ›› Issue (2): 0-262.

• 动物科学 •

基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备(

赵立娜1,2,崔言顺1,任建亭3,李建亮1,黄兵2,李玉峰2,马秀丽2,*

1山东农业大学动物医学院,山东泰安 271018；2山东省农业科学院家禽研究所,山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东济南 250023；3山东省东营市广饶县中等专业中学,山东广饶 257300)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-03-25 发布日期:2011-03-25

Cloning and expression of VP1 gene of Duck hepatitis virus genotype C and preparation of its polyclonal antibody

ZHAO Li-na;CUI Yan-shun;REN Jian-ting;LI Jian-liang;HUANG Bing;LI Yu-feng;MA Xiu-li;*

1College of Animal Science & Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Tai'an 271018, China; 2Institute of Poultry Science, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250023, China; 3Secondary Specialized School in Guangrao County, Shandong Province, Guangrao 257300, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-03-25 Published:2011-03-25

摘要/Abstract

摘要： 采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHV VP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。

关键词: 鸭肝炎病毒, 基因C型, VP1基因, 克隆表达, 多克隆抗体

Abstract: The VP1 gene of strain JFX08 of Duck hepatitis virus（DHV） genotype C was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). To obtain expression plasmid pET-32a-VP1, the VP1 gene was cloned into pMD18-T and pET-32a(+)vectors. SDS-PAGE analysis revealed that the recombinant VP1 protein of genotype C of Duck hepatitis virus was expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) at a high level after being induced with isopropylthio-β-D-galactoside (IPTG) stably. Western-blot revealed that the recombinant protein was recognized specifically by antisera against the genotype C of Duck hepatitis virus. Four-week-old SPF chickens were immunized with the purified recombinant protein. ELISA established by the purified recombinant protein and DHV genotype C revealed that the titer of antiserum was 1∶25 600 and 1∶51 200 respectively, which indicated that the recombinant protein had good immunogenicity．

Key words: Duck hepatitis virus, genotype C, VP1 gene, cloning and expression, polyclonal antibody

赵立娜;崔言顺;任建亭;李建亮;黄兵;李玉峰;马秀丽;* . 基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备([J]. , 2011, 23(2): 0-262.

ZHAO Li-na;CUI Yan-shun;REN Jian-ting;LI Jian-liang;HUANG Bing;LI Yu-feng;MA Xiu-li;*. Cloning and expression of VP1 gene of Duck hepatitis virus genotype C and preparation of its polyclonal antibody[J]. , 2011, 23(2): 0-262.

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基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备(

Cloning and expression of VP1 gene of Duck hepatitis virus genotype C and preparation of its polyclonal antibody

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