葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

›› 2013, Vol. 25 ›› Issue (3): 0-502.

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葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

吴红1，高克利1，曲良谱1，常永义2，*

1江苏畜牧兽医职业技术学院园林科技系，江苏泰州；225300；2甘肃农业大学农学院，甘肃兰州730070

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2013-05-25 发布日期:2013-05-25

Genomic DNA extraction and RAPD system optimization of grape

WU Hong;GAO Ke-li;QYU Liang-pu;CHANG Yong-yi;*

1Landscape Science and Technology Department，Jiangsu Husbandry and Veterinary College， Taizhou 225300， China；2 College of Agronomy， Gansu Agricultural University， Lanzhou 730070， China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2013-05-25 Published:2013-05-25

摘要/Abstract

摘要： 采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA，对其完整性进行了测定，通过单因素五水平试验，筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量，建立了葡萄RAPD技术最优体系，即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1，MgCl２ 2.0 mmol·L-1，dNTP 0.8 mmol·L-1，Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1，引物 0.8 μmol·L-1，建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序，即94℃预变性4 min， 94℃循环变性 45 s，37℃退火 55 s，72℃ 延伸 80 s，40个循环，最后72℃ 延伸10 min。

关键词: 葡萄, 基因组DNA, RAPD优化

Abstract: Using a modified CTAB method， genomic DNA was isolated from 22 grape cultivars and their integrality were analyzed. Content and dosage of template， primer， dNTPs， Mg2+ and Taq DNA polymerase were selected by single factor five level tests and the optimum RAPD systems for grape were established. The total reaction volume was 25 μL containing 40 ng·μL-1 template DNA， 2.0 mmol·L-1 MgCl２， 0.8 mmol·L-1 dNTP， 1 U·μL-1 Taq DNA polymerase， 0.8 μmol·L-1primers. The appropriate PCR procedure was 94℃ 4 min， l cycle; 94℃ 45 s， 37℃ 55 s， 72℃ 80s， 40 cycles; 72℃10 min.

Key words: grape, genomic DNA, RAPD optimization

吴红;高克利;曲良谱;常永义;*. 葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化[J]. , 2013, 25(3): 0-502.

WU Hong;GAO Ke-li;QYU Liang-pu;CHANG Yong-yi;*. Genomic DNA extraction and RAPD system optimization of grape[J]. , 2013, 25(3): 0-502.

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