产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

›› 2010, Vol. 22 ›› Issue (2): 0-149.

• 论文 •

产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

王光华，周继章，蔺国珍，郑福英，曹小安，邱昌庆^*

中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部兽医公共卫生重点开放实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室, 甘肃兰州 730046

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-03-25 发布日期:2010-03-25

Cloning and expression of alpha-toxin gene of Clostridium perfringens Qinghai strain

WANG Guang-hua;ZHOU Ji-zhang;LIN Guo-zhen;ZHENG Fu-ying;CAO Xiao-an;QIU Chang-qing*

Key Laboratory of Veterinary Public Health of Ministry of Agriculture,Key Laboratory of Grazing Animal Diseases of Ministry of Agriculture, State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-03-25 Published:2010-03-25

摘要/Abstract

摘要： 用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1 194 bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET\|28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET\|28a\|CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达。以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性。

关键词: 产气荚膜梭菌, α毒素基因, 基因克隆, 核苷酸序列

Abstract: Alpha-toxin gene was amplified from a field strain of Clostridium perfringens by polymerase chain reaction (PCR), PCR product was cleaved with restriction endonucleases EcoR Ⅰ and Nco Ⅰ, and inserted into the EcoR Ⅰ/Nco Ⅰ site of pET\|28a(+)vector. Recombinant pET-28a-CPA plasmid was transformed into BL21 (DE3)cells. The obtained plasmids were studied in detail by PCR, restriction endonuclease analysis and nucleotide sequencing. The recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21(DE3)and expressed under the induction of IPTG. Western blot analysis indicated that polyclonal goat-anti-serum against alpha\|toxin had specific reaction with recombinant protein. These results indicated that the target protein had a good immunogenicity．

Key words: Clostridium perfringens, alpha-toxin gene, gene cloning, nucleotide sequencing

王光华;周继章;蔺国珍;郑福英;曹小安;邱昌庆*. 产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达[J]. , 2010, 22(2): 0-149.

WANG Guang-hua;ZHOU Ji-zhang;LIN Guo-zhen;ZHENG Fu-ying;CAO Xiao-an;QIU Chang-qing*. Cloning and expression of alpha-toxin gene of Clostridium perfringens Qinghai strain[J]. , 2010, 22(2): 0-149.

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产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

Cloning and expression of alpha-toxin gene of Clostridium perfringens Qinghai strain

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