H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)是我国禽类中最流行的低致病性禽流感(LPAIV),因其持续的抗原漂移与跨物种传播风险对养殖业和公共卫生安全构成严重威胁。为了解浙江省流行的H9N2亚型AIV的遗传进化特征,本研究对当地分离到的5株H9N2亚型AIV毒株的血凝素(HA)基因进行测序与分子特征分析。结果显示,5株分离株分属于欧亚谱系的h9.4.2.1和h9.4.2.5分支,HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为83.51%~99.88%和86.33%~99.83%。值得注意的是,分离株A/Chicken/Zhejiang/HZ01/2022和A/Duck/Zhejiang/TZ01/2022与疫苗株CK/SS/94的HA基因核苷酸同源性仅为88.24%~88.35%,氨基酸同源性为89.43%~90.82%。所有分离株的HA裂解位点均呈单碱性氨基酸特征,符合低致病性病毒特性。受体结合位点分析发现存在I163T、H191N、A198T/V、Q234L和Q235M突变,这些突变可能增强病毒与人源唾液酸α-2,6-半乳糖受体的结合能力。糖基化位点分析显示,分离株存在7~8个潜在糖基化位点,其中218和551位点缺失,206和313位点增加,这些变异可能增强病毒对哺乳动物宿主的适应性。此外,HA蛋白抗原位点存在234、285和334位点突变,而181、280、281与296位点高度保守。研究表明,浙江省H9N2亚型AIV通过关键位点突变和糖基化模式改变持续进化,可能导致病毒毒力增强、疫苗保护效力下降,并增加跨物种传播风险。亟须加强本地流行毒株的分子监测,优化疫苗株匹配性,以提升防控效能并降低公共卫生威胁。