浙江农业学报

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薏苡AFLP体系的建立与优化

孙凤梅;沈晓霞;沈宇峰;张启坤;王志安;*

2014, 26(1): 0-19.

摘要 ( 403 )

PDF(1374KB) ( 1121 )

以30个不同薏苡种质为试验材料，利用AFLP分子标记技术进行遗传多样性及亲缘关系的研究。通过对AFLP常规流程中（基因组提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩增、电泳及银染检测）关键因素进行优化，建立适合薏苡的AFLP扩增检测体系。结果表明，采用酶切与连接分开的两步法，酶切完全，每步反应时间4 h并附加15 min的酶失活时间；连接产物稀释10倍；预扩增产物稀释50倍，试验效果最佳。应用优化后体系，从64对引物中筛选出14对多态性较好的薏苡AFLP选择性扩增引物。

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一氧化氮参与疣粒野生稻对水稻白叶枯病的抗性

成晓越;*;王栩鸣;*;杨勇;周洁;余初浪;韩雪颖;程晔;严成其;陈剑平;**

2014, 26(1): 0-6.

摘要 ( 412 )

PDF(1335KB) ( 940 )

疣粒野生稻高抗水稻白叶枯病，但是其具体的抗性机制目前仍不清楚。一氧化氮（nitric oxide，NO）是一种重要的信号分子，在植物的抗病反应中起到了重要的作用，然而对于NO是否参与疣粒野生稻对水稻白叶枯病的抗性目前仍缺乏研究。以抗病的疣粒野生稻和感病的水稻品种日本晴为材料，研究了接种白叶枯病菌对叶片病斑、NO含量、NO亚细胞定位和木质部超微结构的影响。结果表明，病菌侵染导致了日本晴叶片呈现枯黄色的干枯斑，疣粒野生稻叶片呈现褐色的凋亡斑，而且野生稻的病斑长度要明显短于日本晴的病斑长度。接种白叶枯病菌后日本晴叶片内NO含量未见明显的变化，而野生稻叶片内NO含量则显著升高，并且大部分的NO定位于导管细胞壁内。进一步通过电镜观察，发现病菌侵染诱导了野生稻叶片导管细胞壁厚度的明显增加。基于这些结果，推测NO参与了疣粒野生稻对白叶枯病的抗性，其功能可能包括诱导导管细胞壁增厚，从而抑制病菌的进一步侵染。

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一个水稻矮秆窄叶突变体的鉴定和基因定位

刘继云;叶胜海;李小华;赵小燕;尚海漩;纪现军;邓晓梅;陈萍萍;金庆生;张小明;*

2014, 26(1): 0-13.

摘要 ( 290 )

PDF(1199KB) ( 895 )

常规粳稻秀水09经过甲基磺酸乙酯（EMS）诱变处理，获得了一个矮秆窄叶突变体dnl1（dwarf and narrow leaf 1），经多代自交性状稳定。dnl1突变体与野生型相比，具有植株矮、叶片窄、分蘖强的特点。遗传分析表明dnl1突变性状受1对隐性核基因控制。通过图位克隆的方法，利用SSR分子标记将突变基因dnl1定位在第4号染色体SSR标记RM17478与RM17488之间约260 kb范围内。测序比对分析表明Dnl1可能为Nal1基因.

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南美白对虾鲜度的气味检测技术研究

郭美娟;柴春祥*;鲁晓翔;李立杰;任瑞娟

2014, 26(1): 0-25.

摘要 ( 275 )

PDF(687KB) ( 961 )

以南美白对虾为研究对象，当虾新鲜度变化时，其气味发生改变，结合感官评定和挥发性盐基氮的测定，分别用电子鼻和顶空固相微萃取气质联用技术（HS\|SPME\|GC\|MS）对不同鲜度虾的气味进行了研究。结果显示：构成电子鼻传感器阵列的6个传感器中，有5个传感器的输出信号能在虾鲜度变化过程中呈现有规律的变化。顶空固相微萃取气质联用技术检测表明，虾鲜度变化时，其散发的挥发性成分有含氮化合物、烷烃类化合物、硫化物类及醇类化合物等。将电子鼻各传感器的变化规律和挥发性成分测定相比较，结果表明二者检测结果有较好的一致性，说明可以尝试利用电子鼻评价虾新鲜度。

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鹅源坦布苏病毒RT\|LAMP快速检测方法的建立

韩凯凯;李银*;黄欣梅;赵冬敏;刘宇卓;谢星星;游园

2014, 26(1): 0-33.

摘要 ( 264 )

PDF(823KB) ( 934 )

坦布苏病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。根据GenBank中登录的鹅源坦布苏病毒NS5基因序列，利用Primer Explorer V4软件在序列保守区域设计1套特异识别NS5基因序列中6个不同区段的环介导等温扩增（loop\|mediated isothermal amplification， LAMP）引物，并以此套引物建立一种基于LAMP技术的鹅源坦布苏病毒检测方法。结果表明，该方法灵敏度极高，是普通PCR方法的100倍，只能特异性扩增坦布苏病毒的RNA，对于其他常见禽RNA病毒均无特异性扩增。在反应体系中加入SYBR GreenⅠ染料后，通过肉眼观察有无绿色荧光可直接判定结果。该方法特异性强，灵敏度高，无需特殊仪器，简便，快速，适用于鹅源坦布苏病毒的临床快速检测。

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猪型布鲁氏菌omp31基因的原核表达与亲和纯化

杜志强;吴亚坤;单生苗;刘晓燕;王建英*

2014, 26(1): 0-28.

摘要 ( 328 )

PDF(447KB) ( 896 )

以猪型布鲁氏菌基因组作为模板进行基因序列的扩增，利用大肠杆菌原核表达系统进行重组表达，来研究外膜蛋白基因omp31的序列特性与重组表达情况。结果表明：猪型布鲁氏菌omp31基因的开放阅读框序列全长为723 bp，编码240个氨基酸。通过大肠杆菌原核表达，成功表达出了目标重组蛋白，利用GST\|tag亲和柱进行蛋白质纯化，重组蛋白分子量与预期的553 kD相一致。

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微生态制剂对养殖后期虾池水质及细菌群落的影响

王新;吴逸飞;姚晓红;柳永;孙宏;汤江武*

2014, 26(1): 0-47.

摘要 ( 302 )

PDF(1790KB) ( 1070 )

水产养殖可持续发展的要求促进了微生态制剂的研究，为了解微生态制剂MP\|1和MP\|2的应用效果及其作用机理，选择处于养殖后期虾池开展应用试验，每周从试验池中采样分析水体CODMn、氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐和总氮的变化，并用PCR\|DGGE分析了虾池细菌群落结构的变化。结果显示：投加微生态制剂MP\|1和MP\|2后1周，虾池亚硝酸盐均低于001 mg·L-1，2周后虾池氨氮分别稳定在026～033 mg·L-1和035～048 mg·L-1，试验过程中水体硝酸盐和CODMn保持稳定，总氮的去除率达到341％以上；虾池的主要细菌类群和细菌群落结构发生显著变化。结果表明：微生态制剂MP\|1和MP\|2可显著改善养殖后期虾池水质，其净水作用可能是微生态制剂调控虾池土著微生物群落变化后的共同作用结果。

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猪圆环病毒2型ORF4基因的原核表达及多克隆抗体的制备

王净修;高章照;姜永厚;*;吴海港;饶品彬;全滟平;徐辉

2014, 26(1): 0-39.

摘要 ( 326 )

PDF(790KB) ( 920 )

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，ORF4是PCV2中继ORF1，ORF2，ORF3之后的第四大开放阅读框。本研究以提取的PCV2基因组为模板经PCR扩增获得ORF4基因（386~565 nt），并克隆到pGEX\|4T\|1表达载体上，构建pGEX\|4T\|ORF4表达载体。经PCR和测序鉴定后，将重组质粒转化受体菌BL21诱导表达并进行目的蛋白GST\|ORF4纯化，然后用纯化的蛋白免疫新西兰兔，在免疫期间采血并用间接ELISA对多抗血清进行效价测定。SDS\|PAGE电泳检测结果表明，重组质粒成功表达了目的蛋白。ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶12 800以上。Western blot分析表明ORF4融合蛋白具有很好的免疫原性，获得的抗体可以和大肠杆菌表达的GST\|ORF4融合蛋白特异性反应。

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低温弱光下不同起源地辣椒幼苗光合特性的比较研究

吕晓菡;柴伟国

2014, 26(1): 0-53.

摘要 ( 362 )

PDF(636KB) ( 892 )

以4种不同起源地的辣椒为供试材料，研究不同低温弱光条件下辣椒幼苗光合特性的差异。结果表明，随着温度和光照强度的不断降低，4种不同起源地辣椒幼苗的光合参数和叶绿素荧光参数大致呈下降趋势。这充分说明，低温弱光胁迫可能通过直接降低光合机构的活性，使PSⅡ反应中心遭受破坏来影响辣椒幼苗的光合作用的。另外，在低温弱光下起源于土耳其的材料20805表现出更好的弱光利用能力和更高的光化学效率，而起源于中国长江三角洲地区的材料07\|1\|1\|0\|1\|2则最差。这说明，低温弱光下辣椒幼苗的光合特性差异可能与起源地的气候不同有关。

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芍药休眠芽发育进程内源激素变化研究

袁燕波;王历慧;于晓南*

2014, 26(1): 0-60.

摘要 ( 245 )

PDF(1611KB) ( 958 )

植物花芽的发育与内源激素关系密切。以芍药品种大富贵休眠期花芽为材料，采用高效液相色谱技术（HPLC）分析内源激素GA3，IAA，ZT，ABA在芍药休眠芽发育不同时期的含量变化。结果表明：ABA含量在北京地区11月20日开始增加，12月10日达到最大；GA3含量12月10日开始明显上升，12月30日开始下降；ZT与GA3含量变化基本一致；IAA在休眠过程中含量很低且变化不大；GA3/ABA和ZT/ABA的比值随休眠的加深而减小，随休眠的解除而增大。研究证明GA3和ZT是解除休眠的促进物，这一结果对于施用外源激素打破芍药休眠具有理论指导意义。

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秸秆套网袋栽培对紫山药产量及品质的影响

殷剑美;闫瑞霞;韩晓勇;张培通;郭文琦;李春宏

2014, 26(1): 0-66.

摘要 ( 308 )

PDF(680KB) ( 879 )

设置不同栽培方式试验，研究秸秆（稻草）套网袋栽培技术对浙江黄岩紫山药（又名紫莳药）的产量、品质和生长发育的影响。研究结果表明，紫山药秸秆套网袋栽培可适当增加单株块茎数，同时块茎也相对较大，因此具有显著的增产效果。秸秆套网袋栽培的紫山药块茎相对细长，外形比较受欢迎，同时还能在生长过程和收获时保护紫山药免受地下害虫危害和损伤，外形美观、光滑、完整，具有较好的商品性；另外，秸秆栽培有利于提高紫山药的山药皂苷、可溶性糖、粗多糖和黏液多糖等营养和保健养分含量。秸秆套网袋栽培也属于秸秆栽培，虽然套网有降低山药皂苷和黏液多糖含量效应，但其营养和保健养分的含量仍然较高，因此秸秆套网袋栽培紫山药的商品性和内在品质均提高。

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桑黄总RNA提取方法研究

郭彦萃;熊毅;张志

2014, 26(1): 0-99.

摘要 ( 280 )

PDF(586KB) ( 917 )

为探索适合桑黄总RNA的提取方法，以桑黄菌丝体为试验材料，比较了用Trizol法、CTAB法和RNA prep pure Plant Kit试剂盒法提取后总RNA的质量。结果表明，3种方法均能从桑黄菌丝体中提取分离到总RNA，其中 Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA，28S及18S带型清晰无弥散，A260/A280值为196，RNA 产率为60464 μg·g-1，提取的总 RNA 适用于基因克隆与基因表达分析等分子生物学试验研究。

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湖北省地方审定茶树品种中儿茶素含量分析

金孝芳;贾尚智;石亚亚;龚自明*

2014, 26(1): 0-71.

摘要 ( 339 )

PDF(539KB) ( 1033 )

以12个湖北省地方审定茶树品种为供试材料，采用高效液相色谱法（HPLC）检测分析8种主要儿茶素组分含量。结果表明，儿茶素各组分变异系数在1973%～6717%之间，变异幅度较大；非酯型儿茶素组分含量间的变化趋势不明显，而酯型儿茶素各组分含量大小为EGCG>GCG>ECG>CG。基于儿茶素品质指数进行聚类分析显示，鄂茶1号、鄂茶8号、鄂茶10号3个茶树品种可以作为适制名优绿茶的品种；五峰212、五峰310、鄂茶3号、鄂茶6号4个茶树品种EGCG含量高，可用于开发特殊茶饮；鄂茶2号儿茶素品质指数最低，适制红茶，但其EGC和儿茶素总量最高，应在今后的生产和育种中善加利用。

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六种杀菌剂对柑橘炭疽病菌的室内毒力和田间防治效果

蒲占湑;黄振东;胡秀荣;李红叶;

2014, 26(1): 0-126.

摘要 ( 317 )

PDF(548KB) ( 1071 )

为了筛选高效、低毒、无公害的防治柑橘炭疽病（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）的杀菌剂，采用菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定了吡唑醚菌酯、嘧菌酯、咪鲜胺、唑醚·代森联、甲基硫菌灵和丙森锌对柑橘炭疽病菌的室内毒力。室内测定结果表明：6种杀菌剂对柑橘炭疽病菌菌丝抑制的有效中浓度（EC50）分别为081，258，0066，497，1 55515和23798 μg·mL-1，吡唑醚菌酯、嘧菌酯、咪鲜胺和唑醚·代森联对该病孢子萌发EC50分别为093，1434，447和529 μg·mL-1。田间试验结果表明：嘧菌酯、咪鲜胺、丙森锌和唑醚·代森联在试验剂量下对炭疽病的防效在95％以上。综合室内外试验结果得知，嘧菌酯、咪鲜胺、丙森锌和唑醚·代森联是防治柑橘炭疽病的有效药剂。

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状元红葡萄的脱毒与快繁技术研究

杨光;金桂花;董俊;张青;龚娜

2014, 26(1): 0-76.

摘要 ( 279 )

PDF(505KB) ( 900 )

以状元红葡萄为材料，选取秋季副梢的茎尖为外植体，通过直接诱导丛生芽进行快速繁殖，同时运用热处理和茎尖培养相结合诱导葡萄脱毒苗。脱毒技术研究结果表明，1/2MS培养基比MS培养基的芽诱导率高。适宜的启动培养基为1/2MS+20 mg·L-1 6\|BA+01 mg·L-1 IBA，诱导效果最好。无根苗接种于1/2MS+05 mg·L-1 IBA+02 mg·L-1 NAA的培养基中，生根快，不定根发育良好，利于移栽。其中热处理时间以10 d为宜，这样有利于无根苗的生长和脱毒；经过热处理的无根苗，脱毒率达100%。

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不同气候下亚硫酸氢盐对红富士苹果叶片光合色素含量和果实生长量的影响

陈屏昭;桑正林;何嵋;黄先敏;张泽俊;王锐

2014, 26(1): 0-83.

摘要 ( 296 )

PDF(1651KB) ( 995 )

为观察不同气候条件下，亚硫酸氢盐对红富士叶片光合色素含量和果实生长量的影响，以10～11年生盛果期红富士苹果树为试材，分别在高温、多日照干旱年份和低温、寡日照多雨年份进行外源喷施5 mmol·L-1的 NaHSO3和KHSO3溶液的试验，以喷清水为对照。结果显示，无论是高温、多日照干旱年份还是低温、寡日照多雨年份，两种亚硫酸氢盐处理组叶片的光合色素含量和果实生长量均显著高于同期对照组，且KHSO3的作用效果优于NaHSO3；相同处理组间，低温、寡日照多雨年份的光合色素含量显著高于高温、多日照干旱年份，而果实生长量却明显比干旱、高温、多日照年份低。

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瓦松快繁体系的构建研究

李庆伟;侯殿明;梁明勤;刘荣宁

2014, 26(1): 0-88.

摘要 ( 250 )

PDF(695KB) ( 839 )

以瓦松为研究材料，系统地研究了丛生芽的诱导、增殖及生根培养等，探索瓦松快繁的最佳途径并构建其快繁体系，结果表明: 茎段接种于MS+10 mg·L-16\|BA+02 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖培养基上，茎段增殖倍数可达1169，叶片接种于MS+15 mg·L-16\|BA+01 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖培养基上，能产生很好的不定芽，其再生芽数达971。在1/2 MS+02 mg·L-1IBA+005 mg·L-1NAA培养基中，生根率达100%，平均每株能产生123条根，植株生长健壮。

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黄单胞菌葡萄糖转运系统相关基因的敲除及功能分析

马辰;梁如冰;刘建华*

2014, 26(1): 0-104.

摘要 ( 420 )

PDF(784KB) ( 968 )

分别敲除了植物病原体野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv. campestris 8004）的3个葡萄糖转运蛋白和2个葡萄糖脱氢酶，获得了5株相应基因敲除的突变体。在营养丰富的培养基中，这5株突变体的生长曲线、胞外纤维素酶活性和胞外多糖量与野生型相比并无显著差异。在以葡萄糖为唯一碳源的M63培养基中，XC_2460基因的敲除显著影响了黄单胞菌的生长；在以CMC作为唯一碳源的M63培养基中，XC_2460基因的敲除使突变体的胞外葡萄糖累积量达到野生菌株的167倍。这些结果首次显示阻遏葡萄糖的跨膜转运是改进纤维素分解菌株积累葡萄糖量的有益途径。

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小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域

边靓;向荣;孙丽英;*;陈剑平;*

2014, 26(1): 0-94.

摘要 ( 423 )

PDF(1292KB) ( 928 )

小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus，WYMV）属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员，其基因组是由两条正义单链RNA组成，共编码10个蛋白。其中，VPg（Viral protein genome\|linked）作为病毒末端结合蛋白，与病毒基因组RNA 5’端共价连接。利用软件分析WYMV VPg蛋白氨基酸序列发现其N端具有核定位信号（NLS）序列，C端具有核输出信号（NES）序列。通过激光共聚焦显微镜观察VPg与GFP融合蛋白在烟草细胞中的表达情况发现，GFP\|VPg主要定位于细胞核中。利用eYFP（n）标记核仁结构蛋白Fibrillarin与VPg进行双分子荧光互补实验发现，VPg与Fibrillarin互作且定位于细胞核中。根据VPg结构特点构建一系列缺失突变体与Fibrillarin的互作实验验证了它们之间的互作区域发生在N端NLS区域。

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利用内标为基础的多重RT\|PCR技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒

王红;王菁菁;张科立;成卓敏

2014, 26(1): 0-109.

摘要 ( 380 )

PDF(681KB) ( 859 )

草莓斑驳病毒（SMoV）和草莓轻型黄边病毒（SMYEV）分布较广，危害较重。应用CTAB法提取草莓总RNA，以优质的草莓总RNA为模板，结合扩增内标的检测体系，建立了SMoV和SMYEV的多重RT\|PCR检测体系，可以对草莓田间植株和试管苗进行快速稳定的病毒检测。

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浙江菜区斜纹夜蛾对几类杀虫剂的敏感性

章金明;张蓬军;黄芳;宋亮;刘敏;吕要斌;*;林小勇;叶鑫业

2014, 26(1): 0-116.

摘要 ( 343 )

PDF(1099KB) ( 988 )

为明确浙江菜区斜纹夜蛾对主要杀虫剂的抗药性发展趋势，采集了浙江三门和萧山地区田间斜纹夜蛾，监测其对11种杀虫剂的敏感性水平。结果表明，三门种群和萧山种群对这些杀虫剂的敏感性存在明显差异，且萧山种群对测试药剂的敏感性高于三门种群。参考抗性诊断剂量（田间推荐浓度）处理后存活率和11种杀虫剂LC99致死浓度与田间推荐浓度的比值，推断三门种群对氯虫苯甲酰胺和溴虫腈敏感，对茚虫威、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、啶虫隆、丁醚脲和多杀菌素的敏感性下降，对虫酰肼、乙基多杀菌素、阿维菌素和高效氯氰菊酯已产生抗性；同样，萧山种群对氯虫苯甲酰胺、溴虫腈和多杀菌素敏感，对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、丁醚脲、啶虫隆、乙基多杀菌素、茚虫威、阿维菌素敏感性下降，对虫酰肼和高效氯氰菊酯产生抗性。因此，浙江菜区斜纹夜蛾对大部分监测杀虫剂的抗性正在形成，已产生抗性的高效氯氰菊酯、阿维菌素、虫酰肼应暂停使用1~2年；其余药剂则需要控制用药次数和采用不同种类杀虫剂轮用、混用的方式以延缓抗药性的产生。

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温度对黑肩绿盲蝽生长发育和繁殖的持续影响

何晶晶;郑许松;*;徐红星;杨亚军;吕仲贤;*

2014, 26(1): 0-121.

摘要 ( 392 )

PDF(1352KB) ( 930 )

黑肩绿盲蝽（Cyrtorhinus lividipennis Reuter）是稻田重要害虫褐飞虱的主要天敌，人工饲养和大田释放黑肩绿盲蝽，能有效控制褐飞虱。在实验室研究了不同温度（19，23，27和31℃）对黑肩绿盲蝽生长发育和繁殖的连续3个世代的持续影响。结果表明，19℃条件下随着世代发展，雌若虫历期缩短，子代数量降低；31℃条件下随着世代发展，雌成虫寿命缩短，子代数量降低；其他温度对若虫存活率、雄若虫历期、雌虫体重、成虫寿命和子代数量持续影响不显著。试验结果说明在相对低温19℃和相对高温31℃下，黑肩绿盲蝽的生长发育和繁殖受到抑制。

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百合无症病毒实时荧光RT\|PCR检测方法的建立

余澍琼;*;陈先锋;张吉红;于翠;张慧丽;闻伟刚

2014, 26(1): 0-130.

摘要 ( 322 )

PDF(695KB) ( 903 )

百合无症病毒（Lily symptomless virus，LSV）是侵染百合科植物的主要病毒之一。根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因（coat protein，CP）的保守序列，设计特异性引物与荧光探针，建立了LSV的实时荧光RT\|PCR检测方法。利用该方法检测LSV的2个阳性样品，均能够得到典型扩增曲线，而在百合斑驳病毒、烟草环斑病毒、番茄环斑病毒等其他病毒阳性样品中没有典型的扩增曲线，表明了该方法的特异性。与普通RT\|PCR法相比，此方法灵敏度提高10倍。应用该方法，2012年6月至今，宁波出入境检验检疫局从荷兰进境的67批百合种球样品中检出53批百合无症病毒阳性，检出率为93%。

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液相色谱法同时测定豇豆中吡虫啉和啶虫脒残留

刘景坤;武春媛;邓晓;陈珊珊;李勤奋;*

2014, 26(1): 0-134.

摘要 ( 449 )

PDF(470KB) ( 951 )

经过紫外扫描确定吡虫啉和啶虫脒的最大紫外吸收波长分别为270和246 nm，通过改变其比例优化出峰时间和分离度，确定V（乙腈）∶V（水）=3∶7为流动相，建立了两种农药的标准曲线，结果表明在005 ～ 5 μg·mL-1范围内线性关系均良好。进行样品加标回收实验，用乙腈提取，C18固相萃取柱净化，上述条件进行下分析，01，05，15 mg·kg-1三个加标浓度回收率均在75% ～ 110%，变异系数< 5%，准确性和稳定性都较好，方法最低定量限001 μg·g-1，完全可以用于实际样品的检测。

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检测坦布苏病毒病抗体NS1\|ELISA方法的建立与初步应用

谢星星;李祥瑞;*;李银;*;赵冬敏;黄欣梅;韩凯凯;刘宇卓;游园

2014, 26(1): 0-140.

摘要 ( 272 )

PDF(711KB) ( 1006 )

为建立快速检测鸭坦布苏病毒病抗体的血清学方法，本研究利用鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列将其克隆至原核表达载体pET32a上，建立重组表达pET32a\|NS1，转化至BL21（DE3）中。经IPTG诱导得到NS1融合蛋白，融合蛋白均以包涵体形式存在，包涵体经过变性和复性，纯化的坦布苏病毒NS1蛋白作为包被抗原，在最佳检测条件基础上，建立了检测坦布苏病毒病（Tembusu virus disease，简称TVD）抗体的间接ELISA方法。结果在条件优化后抗原最适包被量为1925 μg·孔-1，抗原最佳包被条件为37℃放置1 h后4℃过夜，血清的最佳稀释度为1∶200，最佳封闭时间为1 h，酶标二抗最适稀释度为1∶1 000，显色时间10 min。阴阳性临界值判定标准为0346。用建立的间接ELISA方法检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎、TVD阳性血清样品均无交叉反应，表明该方法具有良好的特异性。板内和板间重复试验的最大变异系数分别为67％和82％，显示该方法具有很好的稳定性。用间接NS1\|ELISA方法对81份疑似鸭坦布苏病毒病血清样品进行检测，有43份样品呈现阳性，E\|ELISA有48份呈阳性结果，证明该方法具有较高的敏感性。NS1\|ELISA方法的建立为TVB的诊断和流行病学调查提供了一种新的方法。

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新型Resilin\|R5融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化

毛争争;柳永;孙燕;周曼;刘子铎;*;汤江武;*

2014, 26(1): 0-147.

摘要 ( 245 )

PDF(1499KB) ( 897 )

为了获得兼具“高弹性”和“硅沉积”性能的新型功能生物材料，将具有高弹性的Resilin蛋白与具有硅沉积作用的R5肽进行了融合，研究其在大肠杆菌中的表达，建立了简易的纯化方法。首先，将果蝇弹性蛋白基因CG15920序列与硅藻R5肽基因序列进行拼接，经过稀有密码子优化后合成重组基因resilin\|r5。然后将其插入原核表达载体pET28a，转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS获得表达菌株，并通过IPTG进行诱导表达。最后以盐析加热法和Ni离子柱亲和层析法纯化带组氨酸标签的重组融合蛋白。最终实现Resilin\|R5融合蛋白的高效表达，产量达到120 mg·L-1发酵液，为“高弹性-硅沉积”融合蛋白Resilin\|R5的性能表征和创新应用奠定了基础。

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浙江省土壤有机碳密度与储量的初步研究

安玲玲;吕晓男;麻万诸;*;任周桥;邓勋飞;陈晓佳

2014, 26(1): 0-153.

摘要 ( 303 )

PDF(1001KB) ( 932 )

为正确评价土壤在陆地生态系统碳循环以及全球变化中的作用，运用土壤类型法和GIS估算法对2009—2012年间所采集的145个土壤剖面调查资料进行分析，对土壤类型法与GIS估算法的优劣进行比较，并系统研究了浙江省土壤碳库。结果表明，浙江省陆地土壤碳库约为081～083 Pg，平均碳密度约为808～837 kg·m-2，不同类型土壤的有机碳密度差异较大。浙江省土壤有机碳密度以金衢盆地至台温沿海的东南向条带状区域为低值中心，并沿向北、向西、向南3个方向增加。

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社会转型期县域耕地需求量组合研究

田秋霞;张仁陟*

2014, 26(1): 0-176.

摘要 ( 442 )

PDF(694KB) ( 850 )

21世纪处于社会高速转型期，县域耕地需求量的预测是否合理关系到区域和全局的耕地保护压力程度。以夹江县为例，利用粮食安全法、GM (1，1)模型和时间序列预测法对夹江县的耕地需求量进行预测，结合县域的自然、社会经济实际状况及土地利用现状，应用层次分析法对3种预测结果赋予权重，最后用固定权系数预测夹江县的耕地需求量。研究结果表明：2020年耕地需求量14 49359 hm2，2030年为14 28945 hm2，该方法综合了自然、社会经济因素，准确地研究了目标年耕地资源的需求。

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临安山核桃林地土壤磷素状况及其淋失风险分析

赵伟明;王艳艳;马嘉伟;胡杨勇;童根平;赵科理;叶正钱;*

2014, 26(1): 0-158.

摘要 ( 265 )

PDF(780KB) ( 1024 )

以天目山地区临安市岛石镇下塔村和湍口镇湍口村发育于石灰岩的山核桃林地土壤为研究对象，采集林地表层（0～20 cm）土壤样品，用于评估长期施肥对山核桃林地土壤磷素状况的影响及其潜在的淋失风险。土壤分析表明：土壤Olsen\|P存在较大的空间变异，含量低的近于0 mg·kg-1，而最高的含量达 893 mg·kg-1。土壤CaCl2\|P与Olsen\|P相关分析显示，岛石镇和湍口镇土壤Olsen\|P的临界值分别为193和293 mg·kg-1。据此，岛石和湍口两地土壤发生磷淋失的林地分别占调查林地的30%和45%。表明研究区已经有相当数量的山核桃林地因土壤磷素积累而存在淋失风险，需要引起重视。

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原始红松林与人工林土壤微生物多样性分析

熊毅;郭彦萃;张志

2014, 26(1): 0-164.

摘要 ( 261 )

PDF(570KB) ( 926 )

以土壤微生物为研究对象，分析了小兴安岭凉水国家自然保护区内原始红松林及人工林土壤微生物多样性。结果表明： AWCD值随土深与季节变化表现为，在表层与0～10 cm层土中以红松林和紫椴林最高；在10～20 cm层土中以兴安落叶松林在春、夏、秋3季最高，冬季以椴树林最高。各土层的微生物多样性指数均以椴树林最高，且显著高于人工林，综合土壤微生物群落碳源利用类型主成分分析结果得知：原始红松林土壤微生物多样性特征比较明显。

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烧烤竹炭表面结构特征及其对水体中铵氮的吸附行为

袁菊红;胡绵好;*;秦慧媛

2014, 26(1): 0-170.

摘要 ( 347 )

PDF(954KB) ( 936 )

在运用 X射线衍射仪（XRD）、扫描电子显微镜与能谱仪（SEM\|EDS）和傅立叶红外光谱议（FTIR）等仪器分析烧烤竹炭表面结构特性基础上，研究其对水体中铵氮的静态吸附行为。结果表明，以微孔为主的烧烤竹炭表面含有多种含氧官能团，如羟基、羧基等，同时还含有亚甲基、反异烯烃、芳香族和脂肪族结构；烧烤竹炭对铵氮的吸附在80 min内基本达到吸附平衡，其吸附量随着水溶液中铵氮的增加而增加，Freundlich方程能够更好地描述铵氮在烧烤竹炭上的等温吸附行为；系统的ΔG ＜0，ΔH ＞0，烧烤竹炭对铵氮的吸附作用是一个自发的吸热过程；铵氮在烧烤竹炭上的吸附动力学数据符合准二级方程，吸附过程受外部液膜扩散、表面吸附和颗粒内扩散过程的影响。

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高果糖浆含量对椴树蜂蜜玻璃化转变温度的影响

周国燕;张建军;李炫辰

2014, 26(1): 0-180.

摘要 ( 358 )

PDF(408KB) ( 881 )

确定有效的掺假蜂蜜检测方法对监控规范蜂蜜行业具有重要的现实意义。为实现掺入高果糖浆蜂蜜的快速检测，应用差示扫描量热法（DSC）对掺入不同高果糖浆含量的椴树蜂蜜进行玻璃化转变温度Tg测定。研究结果表明：纯椴树蜂蜜与高果糖浆具有显著不同的玻璃化转变温度，Tg值分别为－5545℃，－6086℃；当掺杂高果糖浆含量低于10%时，掺杂椴树蜂蜜的玻璃化转变温度Tg值与纯椴树蜂蜜的Tg值很相近，区分效果不理想；当掺杂高果糖浆含量较高时（20%，40%，80%），高果糖浆质量分数与掺杂蜂蜜的Tg值具有很好的线性关系，基于差示扫描量热法来鉴别掺杂较高含量的椴树蜂蜜是可行的。

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绿色木霉固态发酵生产纤维素酶条件优化与酶的固定化

王晓明;孙玉辉;张欢;刘齐;董晓莹;曹焱鑫;邵丽杰;张大雷;寇巍*

2014, 26(1): 0-193.

摘要 ( 240 )

PDF(1119KB) ( 906 )

以麸皮与秸秆粉为主要原料，对影响绿色木霉固态发酵的因素如麸皮与秸秆粉的比例、发酵温度、时间、含水率、初始pH值、氮源浓度等进行研究。在单因素实验的基础上，采取正交实验设计，结果表明最佳固体发酵条件为：麸皮与秸秆比例4∶1，含氮量2%，培养温度28℃，培养时间72 h，起始pH 5，接种量10%，含水率175%（相对于固体发酵底物）。在此条件下，CMC 酶活达到1 1325 U·g-1，比未优化条件下酶活6124 U·g-1，提高了849%。利用包埋、交联和交联包埋三种方法对纤维素酶进行固定化，其中交联包埋法效果较好。

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风味蛋白酶提升烟叶抽吸品质的研究

肖明礼;杨庆;林锐峰;普元柱;*;包秀萍;李仙

2014, 26(1): 0-185.

摘要 ( 288 )

PDF(1373KB) ( 898 )

为了提升上部烟叶的抽吸品质，采用风味蛋白酶处理降低烟叶中蛋白质含量，并分析了风味蛋白酶处理后烟叶的物理结构、游离氨基酸及香气物质的变化情况。烟叶经风味蛋白酶处理后，质地变疏松；蛋白质含量降低，最大降幅达191%；香气质改善，杂气减轻，刺激减小，余味干净，苦味和辛辣味明显减弱；游离氨基酸和香气物质含量增加。上述结果表明，风味蛋白酶处理可以从多方面提升烟叶抽吸品质。

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不同工艺沼气池产气效果比较研究

徐庆贤;官雪芳;林碧芬;钱蕾;林斌;*

2014, 26(1): 0-199.

摘要 ( 265 )

PDF(722KB) ( 974 )

以福建省新星种猪育种有限公司和福建省永盛农牧科技发展有限公司的钢筋混凝土沼气池、太阳能加热玻璃钢沼气池和智能化上流式玻璃钢沼气池为研究对象，在进料污水相近，水力滞留期（HRT）同为10 d的条件下，比较分析了不同工艺沼气池一年中的发酵温度随气温变化情况、沼气池进出料COD变化情况以及产气效果。结果表明：①相同条件下，未加温玻璃钢沼气池比混凝土沼气池年平均温度高085℃以上，上流式玻璃钢沼气池、折流式玻璃钢沼气池和混凝土沼气池年平均容积产气率分别为074，044和035 m3·m-3·d-1；②太阳能加温玻璃钢沼气池年平均容积产气率为077 m3·m-3·d-1，高于未加温玻璃钢沼气池（044 m3·m-3·d-1）；③智能化玻璃钢沼气池年平均容积产气率为093 m3·m-3·d-1，高于太阳能加温玻璃钢沼气池。

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一种犊牛饲喂控制系统的设计

靳蜜肖;李亚敏*;曾立华

2014, 26(1): 0-209.

摘要 ( 293 )

PDF(445KB) ( 937 )

为实现犊牛的科学喂养，提高经济效益，设计了犊牛自动饲喂控制系统。该系统以PC机为管理平台，基于奶牛信息化管理技术与无线通信技术，以8位CMOS单片机STC89C52、温度传感器DS1820和MPX2100型压力传感器为核心硬件，解决了饲喂时温度和奶量的科学控制问题，实现从奶牛识别到精确饲喂的过程。

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基于ANSYS的土壤耕作过程模拟研究

翟力欣;姬长英;*;丁启朔;郁隐梅

2014, 26(1): 0-215.

摘要 ( 361 )

PDF(1275KB) ( 911 )

为了进一步验证数值模拟的可行性，利用ANSYS进行土壤耕作过程的模拟研究，得到变形区应力分布，并研究耕作阻力的变化。试验与模拟结果均表明，靠近犁体曲率最大处的土壤变形区，在犁体前进方向上的应力最大；在耕作过程中，耕作阻力先逐渐增大，然后略有减小，最后稳定在某值基本不变。

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农村扶贫开发动态评价指标体系构建研究 ——以兰州市为例

张小鸋;付英*;马燕玲

2014, 26(1): 0-234.

摘要 ( 289 )

PDF(817KB) ( 884 )

科学、合理的效益评价体系是成功扶贫行动不可或缺的内容，而当下贫困地区扶贫效益评价体系存在着诸多缺陷。文章从实现可持续发展和反贫困的角度出发，秉持效率、全面、动态、可行的原则，运用AHP\|Delphi法，从政策相关性、扶贫效率、扶贫效果和可持续发展能力方面，重新构建其评价体系，并以兰州市为研究样本进行动态评价与研究。研究表明，兰州市扶贫工作被评为“良好”，所构建的评价指标体系是正确、可行的。

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农户对农村公共物品发起的主动接触研究 ——两个理论的检验

罗芳;陈丽军;田苗;王庆;周业旺

2014, 26(1): 0-221.

摘要 ( 279 )

PDF(651KB) ( 887 )

农户对农村公共物品向各级政府部门或组织发起的主动接触，是需求偏好表达的有效方式之一。农村公共物品需求与社会福利水平有关，后者通常用家庭收入和受教育程度来度量。对于感知需求与社会福利水平关系的研究有两个持不同观点的经典模型，即抛物线理论和需求层次理论。利用湖北省农户数据对这两个理论进行了检验，结果证实抛物线模型更好地拟合了样本数据。

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中国蜂农的养蜂生产风险与灾害补偿机制研究

席桂萍;赵芝俊;吴丽楠;陈玛琳

2014, 26(1): 0-228.

摘要 ( 336 )

PDF(817KB) ( 927 )

中国蜂农在养蜂生产过程中面临着自然灾害、农药中毒、蜂病疫情、偷盗、交通事故等诸多风险，风险发生率较高且损失严重。作为“中国蜜蜂之乡”的浙江省江山市在建立蜂业救助保障机制，提高养蜂业抗御灾害风险能力方面做了有益的探索和尝试。通过分析江山市养蜂业积极加入浙江省养蜂业风险救助、办理养蜂综合保险两种灾害补偿模式的具体做法、运行机制及优缺点对比，提出了积极推进风险救助办法的实施、加强政府对经营蜂业险种的保险公司扶持力度与保险立法建设、探索蜂业政策性农业保险以及在全国范围内推广浙江省江山市蜂业灾害补偿做法的政策性建议。

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台湾农业政策的调整及其对大陆农地规模化经营的启示

黄延廷;武玉

2014, 26(1): 0-240.

摘要 ( 267 )

PDF(734KB) ( 842 )

中国台湾为了摆脱农业危机，从20世纪70年代开始就实施了一系列农业政策，但先期措施不得要领，只得于70年代末80年代初改弦更张：重点发展农地规模化经营，终于取得了显著的效果。其后期措施主要包括：扶助农民购买耕地；推进共同经营、合作经营及委托经营；实施农地重划政策；激励农地租借；等等。其发展农地规模化经营有着较为深厚的理论基础。台湾地区的农业政策调整可为大陆农地规模化经营提供借鉴。

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生计资本对杭州市农民工生活满意度的影响

苏飞;庞凌峰*;马莉莎

2014, 26(1): 0-246.

摘要 ( 295 )

PDF(764KB) ( 950 )

农民工是城市产业工人的主体，对城市建设与发展做出了重要贡献。由于各种生计资本的匮乏影响到城市农民工的生活质量，提高生计资本存量和多样化成为消除农民工贫困、提高其生活满意度的基础与关键。文章对杭州市农民工的生计资本特征进行了深入分析，并通过二元logistic模型评估了生计资本对农民工生活满意度的影响。结果表明：①在杭农民工生计资本存在明显的区域差异，近郊区农民工的生计资本总值最高，中心城区次之，远郊区最低；②在杭农民工各类生计资本转化能力普遍不高，突出表现为物质资本薄弱、人力资本不足、金融资本虚化、社会资本匮乏；③人力资本和社会资本是影响在杭农民工生活满意度的核心要素。最后，提出了增强农民工生活满意度的调控对策，以期为实现在杭农民工生计可持续提供科学参考。

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都市边缘农村地区环境问题成因及其整治对策 ——以上海市华新镇为例

李金文

2014, 26(1): 0-253.

摘要 ( 296 )

PDF(1758KB) ( 903 )

都市边缘农村地区因其独特的地理位置、社会经济及人口结构而呈现出不同于一般农村地区的环境问题，一般农村以农业生产为主，农业面源污染所占负荷较大，而都市边缘农村承接了都市中心区的产业转移，工业污染负荷远超农业面源污染；一般农村以本地人口为主，而都市边缘农村承接大量外来人口，生活污水、生活垃圾产生量较大，环境管理难以展开。本文以典型的都市边缘农村地区——上海市青浦区华新镇为例，从产业发展与外来人口导入的角度，剖析该地区环境问题产生的原因，并针对都市边缘农村地区生活污水、垃圾突出的问题，提出连片处置对策，为类似地区环境整治提供参考。

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基于椭圆傅里叶描述子的香蕉形状识别

胡孟晗;董庆利;*;刘宝林;张重阳;叶飞

2014, 26(1): 200-205.

摘要 ( 555 )

PDF(836KB) ( 1124 )

为实现香蕉形状的识别，文章提出了一种基于计算机视觉和椭圆傅里叶描述子的形状识别方法。先由专家挑选果指果形为弯、微弯、末端直和直的香蕉共107枚，再获取预处理后图像的边界链码并提取其椭圆傅里叶系数，通过比较原形状和重建形状来选取合适的系数个数，然后用主成分分析对非负系数进行降维，最后进行模糊C均值聚类。研究结果表明，可以将该机器识别方法应用于香蕉形状的识别，为实现香蕉及其深加工产品的增值提供了一种技术手段，并为进一步实现香蕉果把和果穗的形状识别奠定了基础。

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调控水稻产量性状的分子机理研究进展

勾晓霞;王建军;*;王林友;张礼霞;范小娟;刘姗;

2014, 26(1): 0-259.

摘要 ( 339 )

随着水稻高产相关基因的克隆与功能分析，调控水稻产量的分子机理逐渐被人们了解与解读。株型控制由基因IPA1及4个直接控制分蘖的基因来共同完成。已报道的与穗发育相关的基因有11个，其中3个基因参与穗分化基本生物学过程，6个基因参与调控籽粒分化比率，2个基因参与调控穗分化期。控制水稻粒型和粒重的基因有5个，分别参与籽粒长、籽粒宽和灌浆过程。水稻产量基因的克隆与解读为水稻高产育种提供了理论指导。

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