鸡传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达及其免疫学原性分析

›› 2010, Vol. 22 ›› Issue (5): 585-589.

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达及其免疫学原性分析

亓丽红,艾武,黄兵,刘涛,秦卓明,宋敏训^*

山东省农业科学院家禽研究所,山东省禽病诊断与免疫重点实验室，山东济南250023

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-09-25 发布日期:2010-09-25

Expression pattern and immunogenicity analysis of Avain infectious bronchitis virus S1 gene in Pichia pastoris yeast

QI Li-hong;AI Wu;HUANG Bing;LIU Tao;QIN Zhuo-ming;SONG Min-xun*

Institute of Poultry Science,Shandong Academy of Agricultural Science, Key Laboratory of Diagnosis and Immunity of Poultry Diseases of Shandong Province, Jinan 250023,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-09-25 Published:2010-09-25

摘要/Abstract

摘要： 根据对山东IBV流行株的遗传变异分析,选取流行代表株LC2,扩增其S1基因,将其S1基因克隆到pPIC9K载体中,构建了真核表达质粒pPIC9K-S1,经SacⅠ线性化后,通过电转化到毕赤酵母GS115中,经MD/MM及G418筛选,PCR鉴定,获得多拷贝阳性重组菌pPIC9K-S1-GS115。将重组菌在0.5％甲醇中进行诱导分泌表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western blot分析。结果显示,在酵母培养基上清中检测到分子量为90 ku为目的蛋白,与鸡IBV阳性血清发生特异性反应。将表达上清及其重组菌菌体饲喂SPF鸡,40 ｄ后采血,可检测到IBV保护性抗体。结果表明:表达的IBV的S1蛋白具有很好的免疫原性,为ELISA诊断试剂盒的研制及IBV疫苗的研制奠定基础。

关键词: 鸡传染性支气管炎病毒, S1基因, 毕赤酵母, 表达, 免疫原性

Abstract: The purified S1 gene fragment of the prevailing Avian infectious bronchitis virus (IBV), from LC2 strain isolated from Shandong Province, was inserted into the eukaryotic expression plasmid pPIC9K. The recombination yeast pPIC9K-S1-GS115 was constructed, and was identified by MD/MM plates,G418 and PCR. The expression induced by pPIC9K-S1-GS115 with 0.5% methanol was identified by SDS-PAGE and Western blot, which was specific with the reference IBV serum. Further more, SPF chickens could be detected positive after being immunized by the expression and recombination yeast. The results suggested that recombinant expression vector was successfully constructed, and the protein was successfully expressed against IBV, which would play an important role in IBV diagnose and vaccine．

Key words: IBV, S1 gene, Pichia pastoris, expression, immunogenicity

亓丽红;艾武;黄兵;刘涛;秦卓明;宋敏训*. 鸡传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达及其免疫学原性分析[J]. , 2010, 22(5): 585-589.

QI Li-hong;AI Wu;HUANG Bing;LIU Tao;QIN Zhuo-ming;SONG Min-xun*. Expression pattern and immunogenicity analysis of Avain infectious bronchitis virus S1 gene in Pichia pastoris yeast[J]. , 2010, 22(5): 585-589.

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