鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用

›› 2012, Vol. 24 ›› Issue (5): 0-786.

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鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用

杨少艳1,2,于可响2,王华2,史玉颖2,马秀丽2,李建亮1,崔言顺1,*

1山东农业大学动物科技学院,山东泰安 271018；2山东省农业科学院家禽研究所,山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室, 山东济南 250023

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-09-24 发布日期:2012-09-24

Cloning and expression of E gene of duck Tembusu virus and preliminary application

YANG Shao-yan;YU Ke-xiang;WANG Hua;SHI Yu-ying;MA Xiu-li;LI Jian-liang;CUI Yan-shun;*

1College of Animal Science &Veterinary Medicine,Shandong Agricultural University,Tai′an 271018, China；2Institute of Poultry Science, Shandong Academy of Agricultural Science,Jinan 250023, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2012-09-24 Published:2012-09-24

摘要/Abstract

摘要： 利用PCR方法从鸭坦布苏病毒山东分离株(BZ株)扩增整个E基因,全长1 503 bp,克隆到pMD18-T载体中,然后将双酶切目的片段亚克隆入pET-28a(+)载体,构建出重组表达质粒PET28a\|E。将PET28a\|E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可表达出分子量约54.8 kD的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E蛋白有很好的反应原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,鸭坦布苏病毒血清为一抗,HRP标记的羊抗鸭IgG为二抗建立间接ELISA方法。采用该方法对80份送检鸭血清进行检测,并与中和试验进行比较,结果显示,两者的符合率为95.0%,表明该方法具有较好的应用前景。

关键词: 鸭坦布苏病毒, E基因, 表达, 间接ELISA

Abstract: The whole cDNA of E gene was amplified by PCR from duck Tembusu virus (DTMUV) strain BZ, and cloned into the pMD18-T vector. The fragment was identified by restriction enzymes digestion with EcoRⅠ and XhoⅠ, and then was cloned into the pET-28a (+) vector. The recombinant expression plasmid PET28a-E was obtained and transformed into BL21 (DE3). After the recombinant bacteria were induced by optimal concentration of IPTG, the E fusion protein was proved to get exact expression and have good immunogenicity by SDS-PAGE and Western blotting. Base on the expressed protein an indirect ELISA was established to detect DTMUV antibody in duck serum. The indirect ELISA shared 95.0% coincidence rate with the neutralization test, which showed that this method had a good prospect on the detection of DTMUV antibody．

Key words: duck Tembusu virus (DTMUV), E gene, expression, indirect ELISA

杨少艳;于可响;王华;史玉颖;马秀丽;李建亮;崔言顺;*. 鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用[J]. , 2012, 24(5): 0-786.

YANG Shao-yan;YU Ke-xiang;WANG Hua;SHI Yu-ying;MA Xiu-li;LI Jian-liang;CUI Yan-shun;*. Cloning and expression of E gene of duck Tembusu virus and preliminary application[J]. , 2012, 24(5): 0-786.

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鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用

Cloning and expression of E gene of duck Tembusu virus and preliminary application

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